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Cuantificación de citoquinas de mono Aotus por RT-PCR cuantitativa en tiempo real
Título de la revista
Autores
Patarroyo, Manuel A.
Pico de Coaña,Yago Barrero, Carlos Cajiao Isabela
Mosquera,Catalina
Fecha
2004-08-21
Directores
ISSN de la revista
Título del volumen
Editor
Elsevier
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Resumen
Aotus spp. Los monos se consideran el modelo ideal para estudiar el progreso de la infección de malaria y la respuesta inmune que provoca. Describimos el uso de una técnica desarrollada recientemente, RT-PCR cuantitativa en tiempo real , para cuantificar varios ARNm de citocinas de monoAotus implicados en las respuestas Th1 / Th2 (IL-4, IL-10, TNF-? e IFN-?). Se diseñaron cebadores específicos para cada citocina y se construyeron curvas estándar usando diluciones en serie de pDNA que contenía cada secuencia diana. Los resultados se normalizaron a los niveles de expresión génica de mantenimiento de GAPDH . Las curvas estándar mostraron altos coeficientes de correlación y fueron lineales en un amplio rango de números de copias. Cuantificación de AotusLas muestras mostraron poca variación intra e inter-experimento, por lo tanto, la técnica ha demostrado ser altamente reproducible y sensible, lo que nos permite detectar tan solo 25 copias / ?l de ADN objetivo. Esta técnica permitirá estudiar los patrones de citocinas Th1 y Th2 provocados en respuesta a la infección para evaluar prospectivamente la eficacia de las vacunas contra la malaria.
Abstract
Palabras clave
Aotus , Citoquinas , Malaria , ARNm , RT-PCR cuantitativa en tiempo real
