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Acceso Abierto
The impact of S6K1 kinase on neuroblastoma cell proliferation is independent of GLI1 signaling
Título de la revista
Autores
Diao, Yumei
Rahman, Mohammed Ferdous-Ur Rahman
Villegas Gálvez, Victoria Eugenia
Wickström, Malin
Johnsen, John I
Zaphiropoulos, Peter G.
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Fecha
2014-08-18
Directores
ISSN de la revista
Título del volumen
Editor
Springer Nature
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Resumen
Antecedentes La diafonía entre la señalización de Hedgehog (HH) y otras cascadas de transducción de señales se ha estudiado ampliamente en diferentes tipos de cáncer. En el neuroblastoma, se sabe que la señalización de mTOR / S6K1 tiene un papel en el desarrollo de esta enfermedad y la evidencia reciente también implica la vía HH. Además, se ha demostrado que la quinasa S6K1 fosforila GLI1, el efector de la señalización de HH, promoviendo la actividad transcripcional de GLI1 y la función oncogénica en el adenocarcinoma esofágico. En este estudio, examinamos la posible interacción de la señalización S6K1 y GLI1 en neuroblastoma. Métodos Se utilizaron las reducciones de siRNA para suprimir la expresión de S6K1 y GLI1, y los efectos de siRNA se validaron mediante PCR en tiempo real y transferencia Western. El análisis de proliferación celular se realizó con el ensayo de incorporación de EdU. El análisis citotóxico con concentraciones crecientes de inhibidores de PI3K / mTOR y GLI, individualmente y en combinación, se utilizó para determinar la respuesta al fármaco. Resultados Aunque la eliminación de S6K1 o GLI1 reduce la proliferación celular de las células de neuroblastoma, hay poco efecto de S6K1 en la expresión de ARNm y proteína GLI1 y en la capacidad de GLI1 para activar genes diana. No se observa fosforilación detectable de GLI1 antes o después de la eliminación de S6K1. La sobreexpresión de GLI1 no puede rescatar la proliferación reducida provocada por la caída de S6K1. Además, los inhibidores de la señalización de PI3K / mTOR y GLI redujeron el crecimiento celular del neuroblastoma, pero no se detectaron efectos inhibidores del crecimiento adicionales cuando se combinaron las dos clases de fármacos. Conclusión Nuestros resultados demuestran que el impacto de la quinasa S6K1 en las células de neuroblastoma no está mediado por la modulación de la expresión / actividad de GLI1.
Abstract
The crosstalk between Hedgehog (HH) signaling and other signal transduction cascades has been extensively studied in different cancers. In neuroblastoma, mTOR/S6K1 signaling is known to have a role in the development of this disease and recent evidence also implicates the HH pathway. Moreover, S6K1 kinase has been shown to phosphorylate GLI1, the effector of HH signaling, promoting GLI1 transcriptional activity and oncogenic function in esophageal adenocarcinoma. In this study, we examined the possible interplay of S6K1 and GLI1 signaling in neuroblastoma. Methods siRNA knockdowns were used to suppress S6K1 and GLI1 expression, and the siRNA effects were validated by real-time PCR and Western blotting. Cell proliferation analysis was performed with the EdU incorporation assay. Cytotoxic analysis with increasing concentrations of PI3K/mTOR and GLI inhibitors, individually and in combination, was used to determine drug response. Results Although knockdown of either S6K1 or GLI1 reduces the cellular proliferation of neuroblastoma cells, there is little effect of S6K1 on the expression of GLI1 mRNA and protein and on the capacity of GLI1 to activate target genes. No detectable phosphorylation of GLI1 is observed prior or following S6K1 knockdown. GLI1 overexpression can not rescue the reduced proliferation elicited by S6K1 knockdown. Moreover, inhibitors of PI3K/mTOR and GLI signaling reduced neuroblastoma cell growth, but no additional growth inhibitory effects were detected when the two classes of drugs were combined. Conclusion Our results demonstrate that the impact of S6K1 kinase on neuroblastoma cells is not mediated through modulation of GLI1 expression/activity.
Palabras clave
Línea celular , tumor , Proliferación celular , Regulación de la expresión génica , neoplásico , Técnicas de eliminación genética , Proteínas erizo , Humanos , Imidazoles , Neuroblastoma , Fosforilación , Piridinas , Pirimidinas , Quinolinas , ARN , interferencia pequeña , Proteína ribosómica S6 quinasas , 70 kDa , Señal , Transducción , Factores de transcripción , Zinc Finger Protein GLI1
Keywords
Cell Line , Tumor , Cell Proliferation , Gene Expression Regulation , Neoplastic , Gene Knockdown Techniques , Hedgehog roteins , Humans , Imidazoles , Neuroblastoma , Phosphorylation , Pyridines , Pyrimidines , Quinolines , RNA , Small Interfering , Ribosomal Protein S6 Kinases , 70-kDa , Signal Transduction , Transcription Factors , Zinc Finger Protein GLI1
